人胚胎癌细胞和胚胎干细胞的RNA干涉

RNA interference in human embryonal carcinoma and embryonic stem cells

编 者：Maryam M. Matin

Peter W. Andrews

出 版 社：LAP LAMBERT Academic Publishing

索 书 号：Q343/M433/2010/Y

藏书地点：武大外教中心

人胚胎癌细胞是畸胎瘤的干细胞，而且是生殖细胞瘤的主要成分。分化好像会导致恶性表型的丢失，可能是遗传变异造成的多能性的丧失。所以很多胚胎癌细胞失去了其分化的潜能。人胚胎干细胞是人胚胎囊胚期内细胞团中的一类多能性细胞。这类细胞可以被诱导分化成三种胚胎生殖细胞。人胚胎干细胞为体外培养各种类型的细胞并用于再生医学提供了可能。发挥这种潜力的关键是开发一些方法来进行基因表达的控制并从而控制细胞分化。其中一方法是RNA干涉，它是以瞬时的方式来控制特定的信号通路而影响干细胞分化特定通路的选择，进而影响多能干细胞的分化。RNA干涉是利用小的干涉RNA以序列特定的方式来沉默目标基因的表达，最早是有法尔和梅洛发现的。

为了探索这种可能性，本文使用RNAi来研究OCT4转录因子对于保持人胚胎干细胞和人胚胎癌细胞的未分化状态是不是必要的，以及强行敲除OCT4基因表达会不会导致分化朝着滋养外胚层的方向发展。已有研究发现鼠胚胎干细胞未分化状态表型的保持和OCT4表达的水平息息相关，而且如果OCT4缺少，细胞就将分化为滋养外胚层。但是，鼠和人的胚胎干细胞还是存在着各种各样的差异（比如不同的细胞表面抗原类型）。所以，并不能推断在鼠胚胎干细胞中有活性的调节因子，其同源物在人胚胎干细胞中就一定执行相同的功能。研究结果发现在人胚胎癌细胞和胚胎干细胞中RNA干涉可以有效的下调基因的表达，而且OCT4的表达对于保持人胚胎癌细胞和胚胎干细胞的未分化状态是必须的。从人睾丸生殖细胞瘤分离的一些人胚胎癌细胞，如2102Ep，833KE，1156QE，1777N，TERA1等对其进行OCT4基因敲除会导致这些细胞的分化，这可以通过细胞表面的抗原的变化来体现出来。RT-PCR结果显示这些细胞朝着滋养外胚层方向分化而且OCT4的RNA干涉导致细胞生长变得迟缓。对于保持细胞多能性以及恶性的必须的靶标基因来使用RNA干涉技术进行敲除，这将为癌症治疗提供了可能。

本书目录

第一章:前沿

第一节：RNA干涉

第二节：鼠胚胎发生

第三节：人细胞的体外培养

第四节：人胚胎癌细胞

第五节：人胚胎干细胞

第六节：B2微球蛋白

第七节：Oct4转录因子

第八节：项目目标

第九节：Oct4下调表达的其他策略

第二章:材料和方法

第一节：材料

第二节：方法

第三章:人胚胎癌细胞和胚胎干细胞的RNA干涉

第一节：引言

第二节：人胚胎癌细胞和胚胎干细胞中RNA干涉介导的EGFP基因敲除

第三节：人胚胎癌细胞和胚胎干细胞中RNA干涉介导的OCT4基因敲除

第四节：讨论

第四章:RNA干涉介导的OCT4的敲除消弱人胚胎性癌细胞的生长

第一节：引言

第二节：siRNA介导的OCT4敲除导致多能以及非潜能性人胚胎癌细胞形态变化

第三节：OCT4敲除影响人胚胎癌细胞分化

第四节：OCT4敲除减缓人胚胎癌细胞的生长

第五节：OCT4的RNA干涉导致人胚胎癌细胞分化为滋养外胚层

第六节：总结

第七节：讨论

第五章:讨论

第一节：一般讨论

第二节：进一步的工作

参考文献

附录

（闫俊杰）